貨號
產(chǎn)品規(guī)格
售價(jià)
備注
BN14027-20 mg
20 mg
¥280.00
產(chǎn)品描述
應(yīng)用范圍:膜電位染色
產(chǎn)品參數(shù)
外觀:可溶于 DMSO 或 DMF 的橘紅色固體
λEx/λEm (MeOH) = 482/497 nm
CAS 號:905-96-4
分子式:C21H21IN2O2
分子量:460.31
分子結(jié)構(gòu)圖:
貯存條件 -20℃ 避光保存,保質(zhì)期一年。
產(chǎn)品介紹
DiOC2(3) (3,3′-Diethyloxacarbocyanine, 碘化物)是一種廣泛應(yīng)用的膜電位探針。如用于線粒體膜電位的研究,DiOC2(3) 能夠穿透真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì),在濃度低于 100 nM 時(shí),染料在具有活躍膜電位的線粒體中積累,形成紅色熒光聚集體,當(dāng)使用破壞線粒體膜電位的(如 CCCP )處理細(xì)胞時(shí),DiOC2(3) 染色強(qiáng)度降低。
DiOC2(3) 染色的細(xì)胞可以通過流式細(xì)胞儀的藍(lán)色激發(fā), 綠色和紅色發(fā)射可視化。該試劑可與其他試劑搭配使用,例 如紅色激發(fā)的 Annexin V–APC,用于活力和凋亡的研究。
使用方法(線粒體膜電位檢測)
DiOC2(3) 標(biāo)記細(xì)胞
由于細(xì)胞類型、培養(yǎng)條件的差異以及應(yīng)用方向的不同,建議起始濃度 50 nM 摸索最佳染色條件。
將 DiOC2(3) 溶于無水 DMSO 配制成 100 mM 的儲 液:向管中加入 435 μL 的無水 DMSO,充分溶解。每次實(shí)驗(yàn)前,需將儲液充分渦旋混勻。
開始實(shí)驗(yàn)前,將 DiOC2(3) 和 CCCP 恢復(fù)至室溫。
1.1 用預(yù)熱的培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖液或其他緩沖液重懸細(xì)胞,使細(xì)胞最終密度為 1×10^6 個(gè)/mL。
1.2 設(shè)置對照,向管中加入 1 μL CCCP 溶液至終濃度為 50 μM,37℃孵育 5 min。
注:CCCP 可以和 DiOC2(3) 同時(shí)添加。為了獲得不同細(xì)胞類型的最佳效果,可能需要滴定 CCCP。
1.3 配置合適濃度的 DiOC2(3)工作液,加入工作液至終濃度為 50 nM,37℃ 孵育 15-30 min。如果進(jìn)行其他標(biāo)記,如用 Annexin V 結(jié)合物標(biāo)記,請執(zhí)行步驟 2.1;如果不需要其他染色,請繼續(xù)執(zhí)行以下步驟。
1.4 (可選)清洗細(xì)胞一次,向每個(gè)細(xì)胞管中加入適量預(yù)熱的 PBS 緩沖液。
1.5 1000 rpm 離心 5 min 1.6 向每個(gè)管中加入 500 μL PBS 緩沖液,輕彈管壁使其重懸。
1.7 使用 YF488 染料的發(fā)射濾光片在 488 nm 激發(fā)下進(jìn)行流式分析。用 CCCP 處理的樣品調(diào)節(jié)補(bǔ)償。
Annexin V 結(jié)合物額外標(biāo)記
可以用額外的標(biāo)記方法檢測 DiOC2(3) 染色后細(xì)胞的凋亡及生存狀態(tài)。如用 Annexin V–APC 標(biāo)記:
2.1 向步驟 1.3 的細(xì)胞中加入適量預(yù)熱的 PBS 緩沖液洗 滌細(xì)胞一次。
2.2 1000 rpm 離心 5 min,然后重懸于 100 μL 1×Annexin 結(jié) 合緩沖液中。
2.3 加入 5 μL Annexin V 結(jié)合物(如 Annexin V–APC)。
2.4 37℃ 孵育 15 min。
2.5 加入 400 μL Annexin 結(jié)合緩沖液。
2.6 用適合于 YF488/PI 和 YF633 染料的發(fā)射濾光片在 488 nm 和 633 nm 激發(fā)下進(jìn)行流式分析。
注意事項(xiàng)
1. 熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
2. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。