貨號(hào)
產(chǎn)品規(guī)格
售價(jià)
備注
BN10048-25nmole
25nmole
¥3160.00
產(chǎn)品描述
應(yīng)用范圍:熒光標(biāo)記染料
產(chǎn)品參數(shù)
Ex/Em: 548/565 nm
分子量:~766
貯存條件:-20℃避光保存, 可以儲(chǔ)存 6 個(gè)月,可以采用 pH7.4 的 10mM Tris 溶解后,分裝保存,避免反復(fù)凍融。
使用方法
DNA 標(biāo)記
1、試劑(自備)
(1) Taq DNA 聚合酶
(2)10× Taq reaction buffer
(3)25 mM MgCl2
(4)dATP, dTTP, dCTP, dGTP (單獨(dú)溶液), 1 mM each
(5)DNA 模板
(6)正向、反向引物,10 μM each
(7)PCR 清潔試劑盒
2、PCR 反應(yīng)
2.1 按照表 1 反應(yīng)體系配制 PCR 反應(yīng)混合液:
2.2 每個(gè)反應(yīng)管加 1μL 1mM Sulfo-Cy3-E-dUTP 注:陰性對(duì)照管,加 1 μL 1mM dTTP 代替 Sulfo-Cy3-E-dUTP
2.3 按照表 2 程序運(yùn)行 PCR 反應(yīng)
注:
1)熱變性時(shí)間依據(jù)不同的 Taq 酶進(jìn)行調(diào)整
2)退火溫度設(shè)置:Tm - 5℃
3)延伸時(shí)間根據(jù)擴(kuò)增片段大小而定,一般 200-300 bp 片段設(shè)為 1 min 即可
2.4 可選步驟用 PCR 清潔試劑盒去除未摻入的單核苷酸
表 1 PCR 反應(yīng)體系
表 2 PCR 反應(yīng)條件
2.5 取 10%的 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳(凝膠不加入DNA 染料),檢測(cè) PCR 反應(yīng)的效率和特異性,通過(guò)紫外凝膠成像儀或激光凝膠掃描儀觀察。
注:凝膠染色前先觀察染料的熒光,以免與下一步的凝膠染料發(fā)生熒光淬滅。
2.6 采用后染法,使用 DNA 凝膠染料對(duì)凝膠進(jìn)行染色,觀察總的 PCR 產(chǎn)物或陰性對(duì)照組的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物。