貨號(hào)
產(chǎn)品規(guī)格
售價(jià)
備注
BN12023-1mL
1mL
¥2200.00
產(chǎn)品描述
儲(chǔ)存條件:4℃ 避光保存,有效期見外包裝。
產(chǎn)品參數(shù):Ex/Em: 480/520 nm(結(jié)合 dsDNA)
產(chǎn)品介紹
PicoGreen 是熒光檢測(cè)dsDNA 并進(jìn)行定量的一種產(chǎn) 品,這種方法非常靈敏。常用于分子生物學(xué)技術(shù):cDNA 文 庫的構(gòu)建、亞克隆的DNA 片段純化及應(yīng)用,比如進(jìn)行DNA 定量、產(chǎn)物擴(kuò)增和引物的進(jìn)一步檢測(cè)。常規(guī)的DNA 含量的 檢測(cè)方法是在260nm處測(cè)其吸光值。這種方法的主要缺點(diǎn)是 核苷酸、單鏈核酸和蛋白質(zhì)對(duì)信號(hào)的影響很大,并且還會(huì)受 到核酸制備過程中污染物的干擾,無法區(qū)分DNA和RNA, 而且這種方法不靈敏(5 μg/mL dsDNA溶液A260 = 0.1)。 PicoGreen 定量檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、方便,成為生物制品殘留 DNA檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)。
PicoGreen 只有與dsDNA 結(jié)合后才發(fā)出熒光,并且所 發(fā)熒光強(qiáng)度與DNA 濃度成正比。 PicoGreen 可以檢測(cè)出 25pg/mL - 1000ng/mL 范圍內(nèi)的dsDNA,且線性關(guān)系較好 (R2>0.99)。
使用方法
試劑制備
PicoGreen dsDNA 定量試劑是以1 mL 的濃縮液形式 保存在無水的DMSO(二甲基亞砜)中。實(shí)驗(yàn)時(shí),配制操 作溶液:2× PicoGreen試劑,將濃縮液用1×TE(10 mMTris-HCl,1 mM EDTA,pH7.5)按1:200的比例稀釋。對(duì) 于終體積為200 μL 的檢測(cè)體系,如果要準(zhǔn)備足夠的操作溶 液測(cè)定20 個(gè)樣品,可在2 mL 1× TE中加入10 μL PicoGreen dsDNA 定量試劑;對(duì)應(yīng)終體積為2 mL 的檢測(cè)體系,檢測(cè) 20 個(gè)樣品,則需要在20 mL 1× TE 中加入100 μL PicoGreen dsDNA 定量試劑。由于試劑容易吸附到玻璃表 面,要在塑料容器中配制。PicoGreen 試劑見光易降解,因此要注意避光保存。
溶液最好在配制好數(shù)小時(shí)內(nèi)使用,以保證最佳結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)方法
1. 標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制:
Sigma 小牛胸腺嘧啶DNA 干粉1 mg(Tris,Nacl等濃度已成標(biāo)準(zhǔn)體系),加入1 mL 雙蒸水,配制成1 mg/mL 的 標(biāo)準(zhǔn)液。
2. 染料工作液的配置:
5 μL PicoGreen 加入1 mL TE(注意:用1×TE將 PicoGreen 稀釋200 倍,現(xiàn)用現(xiàn)配,注意避光)。
3. 標(biāo)準(zhǔn)液稀釋:
(1)母液稀釋:取10 μL(1 mg/mL)標(biāo)準(zhǔn)液加入到990μL TE 溶液中,稀釋成10 μg/mL,取10 μL(10 μg/mL)標(biāo)準(zhǔn)液加 入到990 μL TE 溶液中,稀釋成100 ng/mL。
(2)倍比稀釋:取800 μL(100 ng/mL)的標(biāo)準(zhǔn)液加入到 200 μL TE 溶液中,濃度為80 ng/mL,取500 μL(80 ng/mL) 的標(biāo)準(zhǔn)液加入到500 μL TE溶液中,稀釋到40 ng/mL;依次 倍比稀釋,配成20 ng/ml、10 ng/ml、5.0 ng/ml、2.5 ng/ml.
4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:倍比稀釋后的各梯度標(biāo)準(zhǔn)品溶液和染料工作液各取100 μL 混勻,避光室溫放置5 min。使用FB-15 型便攜式熒光儀檢測(cè)樣品的熒光值:將混合后的溶液加入微量比色皿,注意不要在樣品中引入氣泡,輕彈微量檢測(cè)皿的 外部,可以驅(qū)散氣泡。以1×TE 緩沖液為空白對(duì)照,測(cè)定樣 品和空白對(duì)照的熒光值;或者直接用96 孔板進(jìn)行熒光檢測(cè), 激發(fā)波長(zhǎng)480 nm,發(fā)射波長(zhǎng)520 nm,用標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度 (ng/ml)對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度作直線回歸,制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5. 測(cè)量待測(cè)樣品的熒光值。根據(jù)制作的DNA 濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算待測(cè)樣品濃度。
注意事項(xiàng)
1. 熒光染料均存在淬滅問題,請(qǐng)盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
2. PicoGreen 工作液最好現(xiàn)配現(xiàn)用,以保證最佳結(jié)果。
3. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。