貨號(hào)
產(chǎn)品規(guī)格
售價(jià)
備注
BN50201-48 wells
48 wells
¥1700.00
反應(yīng)種屬:Human 靈敏度:78 pg/ml 檢測范圍:156.25 - 1,0000 pg/ml
BN50201-96 wells
96 wells
¥2700.00
反應(yīng)種屬:Human 靈敏度:78 pg/ml 檢測范圍:156.25 - 1,0000 pg/ml
產(chǎn)品描述
適用于人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本
簡介
PD-1 是T細(xì)胞的跨膜受體屬于免疫球蛋白 B7-CD28 家族中的一員,相對(duì)分子質(zhì)量為 55000,由胞外段、疏水性跨膜區(qū)及胞內(nèi)段三者組成,編碼基因?yàn)榈?2 號(hào)染色體的 PDCD1 基因,胞內(nèi)段的酪氨酸殘基構(gòu)成了 2 個(gè)基序,即免疫受體酪氨酸抑制基序及轉(zhuǎn)換基序兩部分。PD-1 的表達(dá)主要存 在于以下細(xì)胞的膜表面:(1)絕大部分機(jī)體免疫細(xì)胞;(2)多種癌細(xì)胞。
現(xiàn)已證實(shí),B7家族中的 PD-L1(CD274)和 PD-L2(CD273)是 PD-1 的 2 個(gè)配體,二者具有37%的同源序列,但表達(dá)不同。雖然 PD-L2 與 PD-1 相互作用的親和力強(qiáng)于 PD-L1,但 PD-L2 通常處于低表達(dá)狀態(tài)且 表達(dá)范圍局限,故目前認(rèn)為 PD-1 的主要配體為 PD-L1。
T 細(xì)胞通過雙重信號(hào)的刺激發(fā)揮免疫效應(yīng),在信號(hào)傳導(dǎo)過程中需要協(xié)同刺激分子的作用,而協(xié)同刺 激分子又分為正性和負(fù)性 2 種,正 常 生 理 狀 態(tài) 下 二 者 保 持 平 衡。然而,在腫瘤患者中,腫 瘤細(xì)胞會(huì)為自身打造出適合自身生長的腫瘤微環(huán)境,通過各種機(jī)制異常上調(diào)負(fù)性協(xié)同刺激分子,高表達(dá) PD-L1,從而抑制 T 細(xì) 胞 的 活 化與增殖,并使 T 細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的作用減弱,甚至喪失?;?此,腫瘤可躲避機(jī)體的細(xì)胞免疫作用,發(fā)生免疫逃逸,進(jìn)一步出現(xiàn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。PD-1/PD-L1 信號(hào) 通路參與腫瘤免疫逃逸機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜,有研究發(fā)現(xiàn),其可能還與誘導(dǎo) T 細(xì)胞的凋亡、促進(jìn)上皮細(xì)胞間質(zhì) 化等相關(guān)。
檢測原理
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ELISA。用抗人 PD-L1/B7-H1 單克隆抗體預(yù)包被酶標(biāo)板,加入適度稀釋的樣本和標(biāo) 準(zhǔn)品,其中的 PD-L1/B7-H1 會(huì)與其單抗結(jié)合,洗去游離成分;加入生物素化的抗人 PD-L1/B7-H1 抗體, 抗人 PD-L1/B7-H1 抗體與結(jié)合在單抗上的人 PD-L1/B7-H1 結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,洗去游離的成分;加 入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親合素,生物素與親合素特異性結(jié)合,洗去未結(jié)合的酶結(jié)合物;加入顯色劑, 若反應(yīng)孔中有 PD-L1/B7-H1,辣根過氧化物酶會(huì)使無色的顯色劑現(xiàn)藍(lán)色;加終止液變黃。在 450nm 下測 OD 值,PD-L1/B7-H1 濃度與 OD450 值之間呈正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出標(biāo)本中 PD-L1/B7-H1 濃度。
其他實(shí)驗(yàn)材料 (不提供,但可協(xié)助購買) :
1. 酶標(biāo)儀(450nm)
2. 高精度可調(diào)移液器及吸頭: 0.5-10, 2-20, 20-200, 200-1000μ l; 一次檢測樣品較多時(shí),最好用多 通道移液器。
3. 自動(dòng)洗板機(jī)或洗瓶
4. 37℃溫箱
5. 雙蒸水或去離子水
6. 坐標(biāo)紙
7. 量筒
注意事項(xiàng)
1. 試劑盒保存在2-8℃,除復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品,其它成分不可冷凍。
2. 濃縮生物素化抗體(2a)、濃縮酶結(jié)合物(3a)裝量極少,運(yùn)輸中顛簸和可能的倒置會(huì)使液體沾到管壁 或瓶蓋。使用前請離心處理以使附著于管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。
3. 為避免交叉污染請使用一次性吸頭。
4. 終止液和顯色劑具腐蝕性,避免皮膚及粘膜直接接觸,一旦接觸到這些液體,請盡快用大量水沖洗。
5. 使用干凈的塑料容器配制洗滌液,使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7. 不要用其它來源的試劑混合或替代該產(chǎn)品的組分,不同批號(hào)的試劑盒組份不能混用,請?jiān)谟行掌?內(nèi)使用本產(chǎn)品。
8. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測時(shí)建議作雙復(fù)孔或三復(fù)孔,加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)孔 孵育的時(shí)間一樣。
9. 充分混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要,最好使用微量振蕩器(使用最低頻率進(jìn)行振蕩)。
10. 避免操作過程中酶標(biāo)板干燥,干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成分迅速失活,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
11. 適當(dāng)?shù)南♂寴悠罚箻悠分德湓跇?biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),根據(jù)待測因子含量高、中、低的不同,建議采用 1:100, 1:10, 1:2稀釋樣品。如果樣品OD值高于最高標(biāo)準(zhǔn),適當(dāng)增加稀釋度并重復(fù)檢測。
12. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、操作人、移液方式、洗滌方法、孵育時(shí)間及溫度、試劑盒批次的不同均可能會(huì)導(dǎo)致 結(jié)果的差異。
13. 此法可有效的消除可溶性受體、結(jié)合蛋白以及生物樣品中的其他因素的干擾。
14. 不同批號(hào)試劑不可混用。